رضا محمد زاده

ه دلیل افزایش تقاضا برای پروتئینهای نوترکیب عاری از فرآوردههای حیوانی، سلولهای گیاهی به عنوان یک پلتفرم مناسب برای تولید این پروتئینها مورد توجه میباشند. نگهداری ارزان، ساده بودن جداسازی و خالصسازی محصول تولید شده و کشت مستقل از شرایط آب و هوایی، کیفیت خاک، فصلها، طول روز و وضع هوا از مزیتهای استفاده از سوسپانسیونهای سلولی میباشد. در این تحقیق از سلولهای گیاهی -2BY استفاده شد که عالوه بر مزیتهای فوق، سرعت تقسیم باالی سلولی از ویژگیهای مهم سلولهای -2BY است. به منظور بهینهسازی انتقال و بیان ژن در سلولهای -2BY، ابتدا ژن گزارشگرglucuronidase-β) gus (به این سلولها منتقل شد. برای اثبات حضور ژن gus در سلولهای -2BY، قطعه bp521 مورد انتظار با استفاده از PCR تکثیر شد. جهت تایید بیشتر تراریخته بودن سلولهای -2BY، از سنجش بیوشیمیایی GUS که باعث تغییر رنگ )آبی( سلولها میشود استفاده شد. جهت بیان آنزیم بتا- 1و3 گلوکاناز، ژن glucanase -1,3β) bgnI (حاوی اینترون از جدایه قارچ Trichoderma 121pBI همسانهسازی و سازه بدست آمده به سلولهای -2BY -GUS virens در وکتور دوگانه جهت بیان پروتئین منتقل شد. بررسی بیان آنزیم بتا 1و3 گلوکاناز در سلولهای تراریخته، با استفاده از الگوی پروتئینی توسط PAGE-SDS انجام گرفته و بیان آنزیم مورد نظر در سلولهای -2BY مورد تایید قرار گرفت. برای تعیین فعالیت آنزیم بتا1-و3 گلوکاناز (BgnI (از روش دی نیترو سالسیلیک اسید )DNS)، جهت اندازهگیری مقدار قندهای احیا شده حاصل از عمل این آنزیم استفاده شد. نتایج بدست آمده نشان داد که سلولهای -2BY تراریخته قادر به بیان آنزیم بتا 1و3 گلوکاناز فعال میباشند.