مشخصات پژوهش

عنوان	کلون سازی و بیان نوترکیب ایمونوتوکسین حاوی سوماتواستاتین، NGR و توکسین دیفتری
نوع پژوهش	پایان نامه
کلیدواژه‌ها	1-سیستم بیانی باکتریایی، 2- تحویل هدفمند دارو، 3- فیوژن پروتئین، 4- آنتی بادی ، 5-پپتیدهای ضد سرطانی
چکیده	مقدمه : سرطان یکی از عوامل اصلی مرگ در جهان است. با توجه به عوارض روشهای قبلی تحویل داروی هدفمند تبدیل به یک موضوع بسیار مهم شده است. روش درمانی ایمونوتوکسین روشی نوین در درمان سرطان می باشد. در این روش ایمونوتوکسین ها پروتئین هایی هستند که از یک قطعه آنتی بادی یا لیگاند ( به عنوان قسمت اتصالی) متصل به سم ( به عنوان عامل توکسیک ) تشکیل شده اند. سوماتواستاتین پپتیدی 14 اسید آمینه ای می باشد که از اندام هایی مثل سیستم عصبی مرکزی و محیطی، لوزالمعده ، روده ،تیروئید ، غده فوق کلیه ، طحال ،کبد و پروستات تولید می شود. رسپتور سوماتواستاتین در تومور انسان SSTR (Somatostatin reseptor) می باشد. NGR پپتیدی متشکل از سه اسیدآمینه Asn-Gly-Arg می باشد که به طور اختصاصی گیرنده های Aminopeptidase N (APN یا CD13) بر روی غشای سلولهای توموری را شناسایی می کند. مواد و روشها: در این تحقیق ژنهای سوماتواستاتین و NGR که بخش اتصالی سازه را تشکیل می دهند به همراه بخش فعال توکسین دیفتری از بانک اطلاعاتی استخراج شد و سپس ، با قرار دادن جایگاههای برش آنزیمی (NdeI و Hind III) در دو طرف سازه ژنی شرایط را برای بیان در سیستم بیانی pET فراهم شد. به منظور تائید ترانسفورماسیون، Colony-PCR توسط پرایمرUuniversal T7 و همچنین هضم آنزیمی تائیدی انجام شد. به منظور القا بیان از میزبان باکتری BL21( DE3) و IPTG با غلظت نهایی mM 1 استفاده گردید. تائید بیان پروتئین با استفاده از SDS-PAGE و وسترن بلاتینگ با آنتی بادیAnti-His صورت گرفت. تخلیص پروتئین با استفاده از ستون کروماتوگرافی تمایلی Ni-NTA شد. یافته ها: با اتصال اختصاصی این پروتئین به گیرنده از سه طریق تاثیر بر ترشح هورمون، اثر مستقیم و غیر مستقیم بر چرخه زندگی تومور و تاثیر بر رگ زایی باعث مهار تومور می شود.
پژوهشگران	رضا معصومی جهاندیزی (استاد مشاور)، دلاور شهباززاده (استاد مشاور)، مهدی بهدانی (استاد راهنما)، فرخ کریمی مندل بسر (استاد راهنما)، علیرضا صبوری (دانشجو)